目的 获得程序性死亡受体-1基因（Pdcd1）敲除鼠，即C57BL/6J-Pdcd1-/-鼠；构建小鼠荷瘤模型，初步探究Pdcd1基因敲除对肿瘤生长的影响。方法 应用CRISPR/Cas9技术，将Cas9 mRNA和靶向Pdcd 1的gRNA显微注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，利用非同源重组修复引入突变的方式，造成Pdcd1基因蛋白读码框移码和功能缺失，获得C57BL/6J-Pdcd1+/-杂合子小鼠；杂合子小鼠自交，获得Pdcd1基因敲除的纯合子小鼠(C57BL/6J-Pdcd1-/-);接下来，应用PCR和基因测序确定小鼠基因型。提取C57BL/6J-Pdcd 1+/+和C57BL/6J-Pdcd1-/-小鼠外周血，流式细胞仪检测各免疫细胞水平；取小鼠脾脏CD3+T细胞，anti-CD3/CD28 beads激活4天后，流式细胞仪检测活化CD3+T细胞表面PD-1的表达。将3×106个小鼠结肠癌细胞MC38接种于C57BL/6J-Pdcd1+/+和C57BL/6J-Pdcd1-/-小鼠皮下，每隔2天测量一次肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线；取小鼠肿瘤组织，拍照并称重，分析Pdcd1基因敲除对肿瘤生长大小的影响。结果 测序结果序列对比表明，Pdcd1基因2-4号外显子之间缺失1 691 bp,即Pdcd1基因产生了读码框移码突变；小鼠基因型的检测结果显示，引物P1/P2 PCR获得单一的341 bp片段，P3/P4 PCR不能获得条带，成功构建C57BL/6J-Pdcd1-/-小鼠。流式检测结果显示，与C57BL/6J-Pdcd1+/+小鼠相比较，C57BL/6J-Pdcd1-/-小鼠外周血各免疫细胞水平无明显变化，活化的CD3+T细胞表面几乎检测不到PD-1的表达。MC38小鼠皮下荷瘤模型表明，与WT小鼠相比较，C57BL/6J-Pdcd1-/-小鼠荷瘤后肿瘤生长显著被抑制。结论 成功构建Pdcd1基因敲除鼠，小鼠Pdcd1基因敲除能够显著抑制肿瘤生长。
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